碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复Ph至中性时,共价闭合环状质粒DNA的两条互补链仍保持在一起,因此复性迅速而准确,在而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开,复性就不会那么迅速而准确,它们缠绕形成网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
一、碱变性法提取质粒DNA质粒(plasmid)是细菌染色体外能自主独立复制的双股环状DNA,带有遗传信息,可赋予细菌某些新的性状。将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的PCR技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。
即在碱性 pH 下,DNA 分子均变性,恢复中性时,线性染色体 DNA 由于两条链分开且 基因组分子量大,单链互相无规则缠绕,不能准确复性,就与其他成分共沉淀,而质 粒 DNA 分子小且两条闭合环状分子即使变性也较紧密的缠绕在一起,准确复性而留于上清溶液中。
实验过程1、实验试剂溶液Ⅱ0.2Ml NaOH / 1% SDS;异丙醇,无水乙醇,75%乙醇应放-20℃冰箱预冷备用;酚氯仿放4℃冰箱预存;菌液12000rcf离心5min,弃掉上清,加入0.2ml溶液I,充分混匀后,加入0.25ml溶液II,颠倒混匀,室温放置5min,加入0
【2】Zhe Ma, Hui Zhang, Junxi Zheng. Interaction between M-Like Protein and Macrophage Thioredoxin Facilitates Antiphagocytosis for Streptococcus equi ssp. Zooepidemicus.PLOS one. February 2012 ,Volume 7, Issue 2.
2月21日,湖南师范大学生命科学学院,李婷婷(右一)在指导学生做实验。 湖南日报全媒体记者 李健 摄 湖南日报全媒体记者 王铭俊 通讯员 严婧 刘汶添 2月21日,湖南师范大学分子细胞生理实验室,李婷婷手持移液枪,向学生示范质粒提取。
教学中心成立于1997年,2006年被评为首批“国家级实验教学示范中心”,现有29人,其中女性20人,占69%,女党员占党员总数的80%,并分别担任了教学中心主任、副主任、课程团队负责人等多个关键管理岗位,团队成员先后荣获上海市三八红旗集体、上海市首批课程思政示范团队、全国劳动模范、上海市三八红旗手和上海市五一劳动奖章等荣誉称号,是一个名副其实的标兵集体,今天就让我们一起走近这个团队。
摘要:为快速特异检测羊痘病毒属病毒(CaPVs),比较了牛结节性皮肤病病毒(LSDV)、山羊痘病毒(GTPV)和绵羊痘病毒(SSPV)的全基因组序列,选择保守区域设计特异性引物和探针,建立了一种CaPVs通用的Cycleave PCR检测方法。