一、碱变性法提取质粒DNA质粒(plasmid)是细菌染色体外能自主独立复制的双股环状DNA,带有遗传信息,可赋予细菌某些新的性状。将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的PCR技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。
碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复Ph至中性时,共价闭合环状质粒DNA的两条互补链仍保持在一起,因此复性迅速而准确,在而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开,复性就不会那么迅速而准确,它们缠绕形成网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
来源网络整理,侵删!一、大肠杆菌感受态细胞(E.coli DH5α)制备1、前夜接种受体菌(DH5或DH10B),挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜(约16小时);2、取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中,在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.
适逢科技节,近日,长沙市实验中学高二学生踏上了一次精彩的科学之旅——进行DNA的粗提取、模拟DNA双螺旋结构的衍射图谱的实验,开展“现代生物技术与安全”主题辩论赛,还走进湖南师范大学植物分子与发育生物学实验室,亲手揭开了DNA的神秘面纱。